認(rèn)識(shí)真菌熒光染色技術(shù)，從原理及技術(shù)方法開(kāi)始

　　真菌熒光染色技術(shù)被廣泛應(yīng)用于真菌識(shí)別、病原體檢測(cè)等領(lǐng)域，其實(shí)現(xiàn)了對(duì)真菌體內(nèi)結(jié)構(gòu)和代謝產(chǎn)物的可視化觀察。本文旨在介紹真菌熒光染色技術(shù)的原理和方法。
 

　　一、技術(shù)原理
 

　　該技術(shù)主要是以真菌體內(nèi)含有的熒光染料進(jìn)行染色，從而使真菌細(xì)胞產(chǎn)生熒光，達(dá)到觀察和檢測(cè)的目的。真菌體內(nèi)含有的熒光染料主要有：伯克霍爾德胺(Berkeley’s acid)、quinacrine等。
 

　　該技術(shù)的原理是利用熒光顯微鏡(fluorescence microscope)對(duì)生物樣本中含有的熒光物質(zhì)進(jìn)行成像。熒光顯微鏡是一種將激發(fā)光經(jīng)過(guò)標(biāo)本后發(fā)射出的熒光光子轉(zhuǎn)化為圖像的高精度儀器。
 

　　二、技術(shù)方法
 

　　1.準(zhǔn)備熒光染料
 

　　通常使用的真菌熒光染料是quinacrine或伯克霍爾德胺(Berkeley’s acid)，其中quinacrine和伯克霍爾德胺都是吸附在真菌細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)膜上的熒光物質(zhì)。
 

　　2.制備熒光染色液
 

　　將熒光染料溶解在染色液中，將染料均勻分布于液體中。
 

　　3.準(zhǔn)備真菌樣本
 

　　真菌樣本可以通過(guò)培養(yǎng)真菌或從感染患者中獲取。真菌樣本需要先進(jìn)行標(biāo)本加熱處理，以殺死非真菌微生物，然后進(jìn)行固定處理，并在亞甲基藍(lán)(methyl blue)溶液中處理，以防止染色液進(jìn)入細(xì)胞中。
 

　　4.將染色液滴于真菌樣本上
 

　　將制備好的熒光染色液滴于真菌樣本上，并在一定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行顏色反應(yīng)和染色作用。
 

　　5.利用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察
 

　　用熒光顯微鏡觀察染色后的樣本，熒光染料的熒光信號(hào)可以被染色細(xì)胞表現(xiàn)出來(lái)。
 

　　真菌熒光染色技術(shù)是一種重要的生物學(xué)研究技術(shù)，可應(yīng)用于真菌識(shí)別、病原體檢測(cè)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。該技術(shù)通過(guò)染色作用將真菌樣本中的熒光染料標(biāo)記成熒光信號(hào)，用熒光顯微鏡觀察真菌結(jié)構(gòu)和代謝產(chǎn)物的分布位置和數(shù)量，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)真菌體內(nèi)結(jié)構(gòu)和代謝產(chǎn)物的可視化觀察。